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ale93
2011-01-12 21:56
Con questo esperimento si dimostrano le principali differenze e analogie a livello strutturale delle cellule vegetali e delle cellule animali.
MATERIALE NECESSARIO:
-Vetrini copri e porta-oggetto
-Microscopio con obiettivi 4x, 10x, 40x, 100x e oculare 10x
-Blu di metilene 1%
-Spatola in plastica
-Cipolla rossa
-Etanolo 95° non denaturato
PROCEDIMENTO
Si passa una spatola in plastica pulita dentro la bocca, strofinandola nella parte interna della guancia e si depositano le cellule prelevate su un vetrino porta-oggetto.
Il vetrino così preparato è posto su una piastra riscaldante a bassa temperatura (60°C) fino a quando si secca.
Si colora immergendolo per alcuni minuti in una soluzione di blu di metilene 1%.
A questo punto si lava con etanolo 95° fino a quando non scolora più e si essicca nuovamente su piastra (non usare la fiamma perchè i vetrini si rompono molto facilmente.
Si copre con un vetrino copri-oggetto e si osserva al microscopio.
La foto qui sotto è stata presa a 100 ingrandimenti (10x10)
Si prende una cipolla rossa e si taglia un piccolo pezzo della pellicola esterna. Si usa una cipolla rossa per facilitare l'osservazione, perchè non richiede ulteriore colorazione.
Si pone il pezzo di cipolla su un vetrino copri-oggetto e si osserva al microscopio.
La foto è stata fatta a 40 ingrandimenti (4x10)
La prima differenze che si può notare è sicuramente la dimensione, mentre le cellule animali sono difficilmente osservabili a 40 ingrandimenti, è possibile distinguere nitidamente la struttura delle cellule vegetali a questo ingrandimento.
La seconda differenza che salta all'occhio è la struttura: mentre le cellule vegetali hanno una forma quadrata e ben definita, le cellule animali hanno una struttura non ben definita.
Questo perchè le cellule animali, contrariamente a quelle vegetali non presentano la parete cellulare.
Questa è fatta a 400x(40x10) Questa è fatta a 100x(10x10)
NaClO3
2011-01-12 22:13
quindi per le cellule epiteliali hai scelto un preparato e secco, mentre per la cipolla no, che comunque per risaltare i nuclei potevi colorare ugualmente??
bè non c'è da stupirsi, lo stesso nome "cellula" deriva dalla caratteristica dei tessuti vegetali di essere settati, ogni cellula occupa un suo unico scompartimento, una cella appunto!!!
comunque, stupende foto, come diavolo fai a farle??? io al massimo uso il cellulare e una ottima mira nell'oculare!!!
ale93
2011-01-12 22:30
Ho preferito non colorare perchè avevo paura di non riuscire a vedere niente
NaClO3 ha scritto:
comunque, stupende foto, come diavolo fai a farle??? io al massimo uso il cellulare e una ottima mira nell'oculare!!!
Grazie
Semplicemente attacco la macchinetta fotografica all'oculare del microscopio e scatto varie foto, poi scelgo le migliori e le ritaglio per eliminare i cerchi neri attorno
SkyDiver
2011-01-13 18:36
Bello questo esperimento lo abbiamo fatto anche a scuola..però noi avevamo usato una cipolla bianca e avevamo colorato anche quella col blu di metilene evidenziandone il nucleo...poi con l'eosina ne abbiamo colorato il citoplasma..questo ci consentiva di stimare la posizione (e la grandezza) del vacuolo (dato che non era colorato)..è stato divertente!
ale93
2011-01-13 18:43
Ma con il blu di metilene riesco ad osservare la mitosi?
SkyDiver
2011-01-13 18:48
il blu di metilene evidenzia il nucleo della cellula..e nella fase di riproduzione cellulare vengono evidenziate tutte le caratteristiche della mitosi.. si vedono diverse cellule in diverse fasi! il blu di metilene secondo me è infatti un colorante base..da avere.. perchè appunto evidenziando il nucleo aiuta a vedere e studiare meglio la cellula...nella fase "a riposo" e nella fase di "riproduzione"
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NaClO3
2011-01-13 19:41
il difficile è acchiapparle vive e in procinto di scindersi!!
comunque anche l'eosina è essenziale!
SkyDiver
2011-01-13 20:04
si anche l'eosina! beh effettivamente se devo essere sincero non le ho mai viste vive..ma sempre morte..però anche se morte su 100 cellule più o meno riuscivo a vedere tutte le fasi.. ma vive sarebbe più emozionante!
NaClO3
2011-01-13 20:08
esatto, per osservarle che si scindono, deve essere per ragione di cose un preparato a fresco, chiaramente colorato.
Per fissare le cellule in mitosi...va bene anche altro(AcOH,EtOH,ecc.).
Ho sentito dal mio prof di biologia che esiste una proteina che riesce a uccidere le cellule in metafase, voi ne sapete qualcosa?
Dott.MorenoZolghetti
2011-01-13 20:47
Sì, il tuo prof. si avvinazza, vero?
Non è una proteina, ma un alcaloide: la colchicina.
A chi volesse provare, sono sponibile a fornire il prodotto (colchicina) e il colorante specifico (orceina).
Beefcotto87
2011-01-13 20:48
Bho, può essere la colchicina, ma non andiamo troppo OT eh
Dott.MorenoZolghetti
2011-01-13 21:39
Non è affatto OT...costruisci di tanto in tanto...non demolire sempre...
Max Fritz
2011-01-13 21:47
Io avevo fatto delle prove con il reattivo di Schiff (fucsina basica in soluzione decolorata con anidride solforosa) ed eran venuti dei bei risultati... cromosomi ben visibili nello stadio di separazione. Dovrei anche avere qualche foto, se la ritrovo ve la posto. Se non vado errato si usa anche il blu di toluidina come colorante per questi scopi.
ale93
2011-01-13 21:59
Si ma sono tutti coloranti costosi e ultimamente ho speso tutto per un estere dell'acido ossalico
Credo che si possa usare anche il blu di metilene come colorante.
Sarebbe invece interessante fare una colorazione fluorescente, magari con fluorescina?
SkyDiver
2011-01-14 13:12
ma se strappi e tagliuzzi una radice di cipolla, la fissi e la colori... le cellule non andrebbero in contro ad autolisi? cioè.. sopravviverebbero per essere viste vive al microscopio dopo tutti questi trattamenti?
NaClO3
2011-01-14 21:12
se le fissi muoiono, si ritrovano in ambiente secco poracce!!
bisogna allestire un preparato a fresco.
ale93
2011-01-14 21:26
Ma io morte le volevo osservare, così se le ho fissate mentre erano in mitosi, posso osservare le varie fasi in varie cellule...
Anche con l'osservazione in colchicina si utilizzano morte( la colchicina le uccide in metafase)
SkyDiver
2011-01-15 12:50
per preparare un vetrino a fresco..basta realizzare una sottile fetta di campione, metterci una goccia d'acqua, un coprivetrino ed osservarlo giusto? fin quanto le cellule restano vive?
per preparare un vetrino a fresco..basta realizzare una sottile fetta di campione, metterci una goccia d'acqua, un coprivetrino ed osservarlo giusto? fin quanto le cellule restano vive?
Io volevo fare due prove: una prelevando gli apici delle radici di una cipolla, fissarli con acido cloridrico diluito e colorarli con orceina acetica (orceina + acido acetico), poi osservare le varie fasi della mitosi.
Un'altra coltivando una cipolla e iniettando nelle radici appena formate una soluzione di colchicina, che uccide le cellule appena arrivano in metafase e osservare così i cromosomi.
Dite che si può fare?
SkyDiver
2011-01-15 13:32
beh si può provare..infondo teoricamente si può far tutto se l'idea è buona (e la tua è buona) quindi..mettila in pratica e vedi cosa succede! una volta infatti avevo provato ad annaffiare una pianta con acqua e colorante (blu di metilene) e siccome le radici assorbono l'acqua e la portano alle cellule esse si erano colorate..poi la pianta non so che fine ha fatto eprchè era della scuola ma è stata carina come cosa! (la colorazione era però superficiale..ma c'era!)
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**R@dIo@TtIvO**
2011-01-16 13:39
Anche io tempo fa feci la foto alle cellule dell'epitelio boccale ma operando in modo molto più semplice e sbrigativo nel colorarle: ho strofinato una bacchettina di plastica all'interno della bocca, ho preparato in precedenza una sol all'1% di blu di metilene e posto due gocce di essa nel vetrino, poi ho strofinato la bacchetta sulle gocce nel vetrino e chiuso con il coprioggetti, questa fu la foto che ottenni, purtoppo fatta col cell, non avevo ancora la macchina fotografica gli inrandimenti sono di 10x
Se le trovo inserisco anche le foto della cellula vegetale.. comunque i nuclei sono quelli blu ovviamente e le cellule quelle diciamo viola..
SkyDiver
2011-01-16 15:04
carine..anche io quando le voglio osservare noto che sono tutte ammassate..stavo cercando il modo di "separarle" per poterle vedere meglio
NaClO3
2011-01-16 15:10
pre separarle si usa strisciare su buona parte della superficie del vetrino porta oggetti||
SkyDiver
2011-01-16 15:15
Ecco qui a proposito di cellule un po di globuli rossi con un gl.bianco! che ne pensate? vorrei un vostro parere..
ale93
2011-01-16 15:39
Belle ma non le hai colorate vero?
Io vorrei provare con il Giemsa...ma non so come si prepara.
SkyDiver
2011-01-16 15:41
il problema è proprio questo..che io le ho colorate!! haha ci ho messo il blu di metilene per 3 minuti dopo avere fissato le ceellule con alcool..poi ho sciacquato il tutto e ci ho messo l'eosina..poi ho risciacquato e col cellulare sull'oculare ho fatto la foto! ma non sembra si siano colorate...non capisco cosa sbaglio..
il problema è proprio questo..che io le ho colorate!! haha ci ho messo il blu di metilene per 3 minuti dopo avere fissato le ceellule con alcool..poi ho sciacquato il tutto e ci ho messo l'eosina..poi ho risciacquato e col cellulare sull'oculare ho fatto la foto! ma non sembra si siano colorate...non capisco cosa sbaglio..
Devi fissarle prima di colorarle, altrimenti si gonfiano per osmosi a contatto con colorante ed esplodono
SkyDiver
2011-01-16 15:59
la fissazione con alcool va bene no? ci spruzzo un po' d'alcool a gradazione 90° e aspetto che si asciughino.. c'è per caso un altro sistema? si possono fissare alla fiamma le cellule del sangue?
NaClO3
2011-01-16 16:04
certo che puoi, l'importante è che non le carbonizzi, devono soltanto asciugare, poi le colori, lavi e rifissi., poi goccia di olio di cedro e ci fai qualche foto a 100x
SkyDiver
2011-01-16 16:10
grazie!! stasera ci provo subito e domani dopo la scuola posto le foto! (=>se si vede qualcosa haha)
la fissazione con alcool va bene no? ci spruzzo un po' d'alcool a gradazione 90° e aspetto che si asciughino.. c'è per caso un altro sistema? si possono fissare alla fiamma le cellule del sangue?
Devi usare l'alcool per liquori, quello rosa ti lascia un brutto residuo quando asciuga.
Ecco cosa ho visto io senza colorazione, solo fissando le cellule a 400x
SkyDiver
2011-01-16 17:51
dato che ce l'ho fatta posto adesso qualche fotina..datemi dei pareri e dei consigli eh!
NaClO3
2011-01-16 17:55
polinucleata la I cellula??
la II sembra la stessa, gli ultimi sono eritro?
SkyDiver
2011-01-16 17:58
dunque premetto che sono un neofita quindi ne so poco..ihih sono cellule del mio sangue che ho colorato con eosina e blu di metilene.. il primo gl.bianco effettivamente sembra polinucleato, nella seconda foto i 2 gl.bianchi hanno sempre il nucleo caratterizzato da queste diramazioni e nella terza foto ci sono eritrociti e un gl.bianco in alto. (sono pieno di gl.bianchi ma mi ammalo sempre.. haha..li vedo un po' contorti infatti haha)
NaClO3
2011-01-16 18:04
sei pieno di globuli bianchi??
o hai un'infezione in corso, o ti sta venendo, o ti è appena venuta!
SkyDiver
2011-01-16 18:08
si esatto bravo mi è appena venuta!!! sono guarito da poco... xdxd mi piace farmi queste analisi! ihih
Beefcotto87
2011-01-16 18:35
Il primo, anche se dubito della qualità delle colorazioni (non ti offendere XD), sembra essere un eosinofilo, gli altri 2 neutrofili... Se a questo si unisce che probabilmente hai avuto qualcosa di virale, averli trovati non è niente di significativo!
PS: gli eosinofili sono più frequenti in fenomeni allergici e parassitari, i neutrofili, che sono i globuli bianchi più diffusi in assoluto nel sangue (in condizioni normali), invece in infezioni batteriche (ho volutamente saltato le condizioni non infettive, come l'infarto al miocardio).
SkyDiver
2011-01-16 18:42
ah ma io sono particolare in questo senso...sono un soggetto con gravissime allergie a pollini ed imenotteri, infezioni virali e batteriche sono ormai mensili... i miei globuli bianchi non hanno un ordine ormai! XD P.S. non mi offendo affatto! anzi...se hai qualche consiglio dì pure!
Beefcotto87
2011-01-16 18:45
Bhe, sei sempre umano!! XD
L'aumento dei granulociti nel sangue non è apprezzabile dalla visione microscopica se non in rari casi, si preferisce usare ricerche immunoistochimiche o immunoenzimatiche con macchine preposte.
Come hai preceduto? che tempistica hai usato?
SkyDiver
2011-01-16 18:49
dunque all'inizio ho riscaldato con una fiamma lo striscio di sangue per "incrostarlo" sul vetrino..poi ci ho spruzzato dell'alcool a 90° circa.. ho aspettato e ci ho messo del blu di metilene per 3 minuti, ho sciacquato, ci ho messo dell'eosina per altri 3 minuti, ho risciacquato e poi ci ho messo il vetrino coprioggetti (tra il sangue e il coprioggetti c'era sempre una goccia d'acqua distillata)
Beefcotto87
2011-01-16 18:50
Mmmm... Il Giemsa non è, è molto più complesso, diciamo che hai usato una tecnica base (più usata in realtà nelle colorazioni microbiologiche che istologiche)
SkyDiver
2011-01-16 18:59
no no ma immagino che il giemsa sia più complesso..non volevo fare quello volevo fare una colorazione doppia.. ma effettivamente conviene fare 2 preparati..uno colorato col blu e uno col rosso..in uno si osserveranno meglio gli eritrociti e in uno i nuclei dei gl.bianchi!
Beefcotto87
2011-01-16 19:01
Io sinceramente preferisco altri liquidi biologici, così uso la colorazione di Gram!
ale93
2011-01-16 19:02
Beef tu sai come si prepara il Giemsa?
SkyDiver
2011-01-16 19:02
beh effettivamente hai ragione! cosa usi? (e dove posso trovare ciò che usi? XD)
Beefcotto87
2011-01-16 19:07
Io uso i coloranti per la Gram e volendo anche quelli per la Ziehl-Nielsen, ovvero
Gram= Crystal Violetto - Liquido di Lugol - Decolorante - Carbol-fuchsina
Ziehl-Neelsen= Carbol Fuchsina - HCl/EtOH o H2SO4 al 20% - Blu di metilene
Poi ho un po' di coloranti ma devo ancora usarli
SkyDiver
2011-01-16 19:09
mm..wow da quando mi sono iscritto a questo forum sto imparando un sacco di cose...grazie a tutti eh! adesso col tempo mi specializzerò.. il lugol lo vendono in farmacia?
Beefcotto87
2011-01-16 19:13
Non saprei sinceramente, io ho comprato un kit da www.biolifeit.com
SkyDiver
2011-01-16 19:17
grazie per il sito gli darò un'occhiata. Proverò altri metodi di colorazione e fissazione e domani posterò qualche foto (magari cambio soggetto..al posto del sangue esaminerò qualcos'altro..)
Dott.MorenoZolghetti
2011-01-16 19:52
Scusate, ma di queste cose non c'era già una discussione?
Si è ampiamente parlato di Giemsa e silimi.
Ripetere è davvero così utile?
Beefcotto87
2011-01-16 19:58
Certamente, ma in realtà l'intera discussione non ha nemmeno fondamenti logici!
E' un po' come un foglio di brutta... Prima o poi va tolto di mezzo
**R@dIo@TtIvO**
2011-01-22 14:05
Oggi ho visto le cellule della cipolla sempre con un metodo molto sbrigativo: sol di blu di metilene, pellicola della cipolla.. semplice semplice come vedete..
Questa foto ingrandita a 10x (10x) 100x :
qui 40x (10x) 400x , si vedono meglio i nuclei:
Ho aggiunto una sol di NaCl per far separare dopo alcuni minuti i mitocondri dalla membrana cellulare, eccone uno molto grande: (modificato: non è mitocondrio)
ale93
2011-01-22 14:30
Se aggiungi una soluzione di NaCl le cellule si restringono se non le hai fissate prima.
Non sapevo che consentisse di vedere i mitocondri
NaClO3
2011-01-22 14:44
idem, noi, in I abbiamo fatto una cosa simile proprio per verificare la pressione osmotioca d una sol. di NaCl su cellule con parete, o esplodono con acqua distillata, o si ragrinziscono con NaCl.
**R@dIo@TtIvO**
2011-01-22 14:46
si dovrebbero restingersi e i mitocondri separarsi dalla membrana infine quello nella foto è proprio un mitocondro
Beefcotto87
2011-01-22 15:21
PROPRIO, al massimo...
Max Fritz
2011-01-22 16:03
In base a cosa affermi che sia un mitocondrio? A me non pare... e poi non ho mai sentito parlare di mitocondri al microscopio ottico; magari mi sbaglierò, ma fino a prova contraria per me quello non è un mitocondrio (intendi quella strisciolina violetta no?)
Beefcotto87
2011-01-22 16:42
Ah, quello intendi????? O.O Se è vero, PENTITI!!!! Un mitocondrio più grosso della cellula stessa?? Ma siamo matti?
**R@dIo@TtIvO**
2011-01-23 00:04
Quanto mi fate ridere ...
A me han detto così, che se aggiungevo qualche goccia di una sol di NaCl si sarebbero staccati i mitocondri dalla membrana cellulare.. infine prima non c'erano dopo l'aggiunta sono apparsi sti "filamenti" e sono parecchi, questo è solo un particolare..
Poi se non lo è poco importa!
Riguardo "propio" beh si può dire sarebbe lo stesso di proprio anche se più arcaico
http://www.etimo.it/?term=propio
SkyDiver
2011-01-23 07:16
ma non può essere quel filamentone un mitocondrio! sai quanto sono grandi i mitocondri rispetto alla cellula?? sono così piccoli che una teoria vuole che al principio cellula e mitocondrio fossero due esseri viventi separati ma che per essere difeso il mitocondrio sia entrato nella cellula aiutandola a respirare.. è troppo grande quel "coso" per essere quello che dici..non è un mitocondrio! sarà sporco..un alga che si è colorata o che per osmosi magari dopo che hai messo il sale si è gonfiata (questo spiga il perchè prima non ci avevi fatto caso!)
Beefcotto87
2011-01-23 08:31
Più probabilmente è polvere... Una fibra vegetale, per esempio! O solo cellule sfaldate :S Non cominciamo a vedere cose di fantabiologia eh!
PS: "propio" è un termine ormai obsoleto e "rurale", vediamo di scrivere proprio
SkyDiver
2011-01-23 08:39
poi so che per vedere i mitocondri si ha bisogno del verde di jano..mi piacerebbe averlo..qualcuno sa dove trovarlo?
**R@dIo@TtIvO**
2011-01-23 10:21
Come non detto, come vedete basta solo dire e aiutare a capire l'errore ed è fatta! Non è un mitocondrio bene, colui che mi ha riferito questo dato vorrà dire che non capisce un emerito cavolo di bruxelles a riguardo.. tutto qui !
Max Fritz
2011-01-23 10:55
Quest'ultima risposta già è meglio. Come ho avuto più occasione di dire, la disinformazione non possiamo concederla. Quindi pregherei di accettare le critiche di uno che ne sa molto più di te (Beef in questo campo è uno dei migliori che abbiamo qui, insieme a Zolghetti). Ciò che si discuteva era la categorica affermazione: "questo infine è proprio un mitocondrio". Ora direi che si può chiudere qui la questione
Quel filamento, insieme agli altri, penso sia costituito da pezzetti di parete cellulare.. o sbaglio?
**R@dIo@TtIvO**
2011-01-23 12:46
Giusto e porgo le mie scuse a Beef!
Ritornando in tema, non mi vien altro da pensare che quel filamento sia o la parte di pellicola della cipolla che prelevai o parte di membrana cellulare staccatasi dopo l'aggiunta della sol.
SkyDiver
2011-01-23 12:49
non credo che tu sbagli dato che hp ropetuto l'esperienza di r@dio@ttivo e, come volevasi dimostrare, non è venuto fuori alcun mitocondrio..ma le cellule si sono raggrinzite tutte (come è chiaro che accada)
un alga che si è colorata o che per osmosi magari dopo che hai messo il sale si è gonfiata (questo spiga il perchè prima non ci avevi fatto caso!)
se mai, il contrario..
ale93
2011-01-23 14:22
La cellula se la metti in una soluzione la cui concentrazione del sale è maggiore dello 0,9% va in plasmolisi, ovvero si restringe, se la metti in una concentrazione inferiore va in lisi, ovvero esplode.
x SkyDiver i coloranti li trovi in alcuni ottici specializzati(salmoiraghi e viganò)
NaClO3
2011-01-23 14:30
questo si lo so, su questo meccanismo la piante si sorreggono, intendo non quelle legnose!
ma non credo che Radioattivo abbia usato una soluzione a conc. <0.90%.
**R@dIo@TtIvO**
2011-01-23 14:45
Era superiore
SkyDiver
2011-01-23 16:00
salmoiraghi e vigano lo conosco bene..ma per quelle cose ha un limite minimo di spesa di 100 euro..uffa! comunque..si mi sono sbagliato sul fenomeno chimico eprò il concetto era quello!!
ale93
2011-01-23 16:02
Cioè, se vai in un negozio ti chiedono il limite minimo?
SkyDiver
2011-01-23 16:14
ah beh no io parlavo dell'ordine online.. nel negozio posso passare, è lontano ed ho poco tempo (per questo faccio gli ordini online) però appena posso vado, ordino, provo e poi magari faccio qualche recensione!
1991davide
2011-01-23 20:08
Le cellule vegetali sono relativamente semplice, al loro interno troviamo vari organelli, il più grande è il vacuolo che occupa ben il 90% della cellula. Per poterlo osservare vi serve un microscopio.
Prendete una cipolla, toglietene uno strato, nella parte interna c'è una sottile cuticola cercate di prenderla e stendetela su di un vetrino con una goccia di acqua. Osservando vedrete tutte le cellulle attaccate, sono di forma allungata, il vacuolo non è ancora ben visibile perchè è aderente alla parete cellulare. Mettete una goccia di acqua salata e aspettate un po'. tornando ad osservare vedrete che il vacuolo si è ristretto grazie al fenomeno dell'osmosi.
Per fare ritornare tutto come prima basterà togliere la goccia di acqua salata e mettere acqua distillata.
ale93
2011-01-23 20:11
C'è già una discussione...
Non è il vacuolo che si restringe, ma l'intera cellula che va in plasmolisi, appunto per osmosi, avviene anche nelle cellule animali, che non hanno il vacuolo.
Poi se metti una goccia d'acqua le cellule esplodono, la goccia, se non le hai fissate deve avere una concentrazione di NaCl allo 0,9%