2010-07-18, 01:34 (Questo messaggio è stato modificato l'ultima volta il: 2010-07-18, 01:48 da Dott.MorenoZolghetti.)
Nel sangue umano esiste una frazione liquida (plasma) e una frazione cellulata (corpuscolata). Questa è composta da eritrociti (globuli rossi), leucociti (globuli bianchi) e trombociti (piastrine).
Sulla frazione liquida si dosano elettroliti, proteine, enzimi, immunoglobuline, lipidi, metalli, ecc.
Sulla frazione cellulata, mediante l'esame emocromocitometrico si eseguono i conteggi delle singole cellule e se ne apprezzano le caratteristiche essenziali (colore, dimensioni). La serie bianca è studiata tramite quella che si chiama "formula leucocitaria".
Tutte queste determinazioni oggi vengono condotte in modo automatizzato, operando con macchine dette "contaglobuli automatici".
Per lungo tempo però, quando ancora l'automazione non aveva avuto tanta espansione, l'esame emocromocitometrico con la formula leucocitaria erano eseguiti a mano, con l'ausilio di una pipetta, di una camera contaglobuli di Burker, due pipette di Thoma e un microscopio ottico. Ora, tralasciando gli aspetti quantitativi (conteggio cellulare), per evitare complicazioni di esecuzione, vi racconterò due cose sulla formula leucocitaria, anzi, ancora più esattamente sullo striscio ematico e la sua colorazione.
Esecuzione dello striscio ematico
Occorrono due vetrini portaoggetto.
Su di uno, posto su di un piano orizzontale, si pone una goccia di sangue (non più di 15-20 microlitri), proprio sul centro, a 2 cm dal bordo stretto del vetrino. Poi, tenendo con due dita il vetrino, si appoggia l'altro inclinandolo di 45°, facendo in modo che il suo bordo tocchi la goccia di sangue e che questa si disperda lungo tutto il bordo. Quindi si trascina in avanti il vetro inclinato, senza staccarlo dal contatto con l'altro vetro orizzontale, fino al fondo. La goccia di sangue è così distribuita sul vetro orizzontale.
Agitare il vetrino per far asciugare il sangue.
Colorazione di May-Grunwald-Giemsa
Occorrono: colorante di May-Grunwald e colorante di Giemsa, due piepette, una soluzione tamponata al fosfato a pH 7,0.
Le soluzioni di colorante sono già pronte, commerciate appositamente per l'uso. Sono alcoliche (metanolo) e si usano diluite per colorare, pure per fissare le cellule.
La procedura è la seguente:
depositare sullo striscio 10 gocce di liquido di May-Grunwald puro, attendere 3 min, quindi aggiungere 20 gocce di soluzione tampone a pH 7
e lasciare agire per 3-4 min. Quindi gettare il colorante, sollevando il vetrino.
Aggiungere 5 mL di liquido di Giemsa diluito prima dell'uso (5 gocce di colorante puro ogni mL di soluzione tamponata pH 7). Lasciare agire per 10-12 min. Quindi lavare con acqua distillata per almeno 3 min.
Asciugare all'aria e osservare al microscopio dopo montaggio con balsamo del canadà o montante sintetico, oppure dopo oleatura con olio da microscopia (olio di legno di cedro o sintetico).
Per foto e approfondimento vi consiglio questo sito molto ben realizzato, semplice ed esaustivo: www.leopardifg.it/media_gatto/as2005-2006/AS0506_CL5E5F/WebCorpoUmano/pagina_celluladelsangue.htm
Se qualcuno di voi fosse interessato, potrei fornire gratuitamente l'occorrente per allestire qualche vetrino, a patto che abbia modo di osservarlo al microscopio ottico.
Sulla frazione liquida si dosano elettroliti, proteine, enzimi, immunoglobuline, lipidi, metalli, ecc.
Sulla frazione cellulata, mediante l'esame emocromocitometrico si eseguono i conteggi delle singole cellule e se ne apprezzano le caratteristiche essenziali (colore, dimensioni). La serie bianca è studiata tramite quella che si chiama "formula leucocitaria".
Tutte queste determinazioni oggi vengono condotte in modo automatizzato, operando con macchine dette "contaglobuli automatici".
Per lungo tempo però, quando ancora l'automazione non aveva avuto tanta espansione, l'esame emocromocitometrico con la formula leucocitaria erano eseguiti a mano, con l'ausilio di una pipetta, di una camera contaglobuli di Burker, due pipette di Thoma e un microscopio ottico. Ora, tralasciando gli aspetti quantitativi (conteggio cellulare), per evitare complicazioni di esecuzione, vi racconterò due cose sulla formula leucocitaria, anzi, ancora più esattamente sullo striscio ematico e la sua colorazione.
Esecuzione dello striscio ematico
Occorrono due vetrini portaoggetto.
Su di uno, posto su di un piano orizzontale, si pone una goccia di sangue (non più di 15-20 microlitri), proprio sul centro, a 2 cm dal bordo stretto del vetrino. Poi, tenendo con due dita il vetrino, si appoggia l'altro inclinandolo di 45°, facendo in modo che il suo bordo tocchi la goccia di sangue e che questa si disperda lungo tutto il bordo. Quindi si trascina in avanti il vetro inclinato, senza staccarlo dal contatto con l'altro vetro orizzontale, fino al fondo. La goccia di sangue è così distribuita sul vetro orizzontale.
Agitare il vetrino per far asciugare il sangue.
Colorazione di May-Grunwald-Giemsa
Occorrono: colorante di May-Grunwald e colorante di Giemsa, due piepette, una soluzione tamponata al fosfato a pH 7,0.
Le soluzioni di colorante sono già pronte, commerciate appositamente per l'uso. Sono alcoliche (metanolo) e si usano diluite per colorare, pure per fissare le cellule.
La procedura è la seguente:
depositare sullo striscio 10 gocce di liquido di May-Grunwald puro, attendere 3 min, quindi aggiungere 20 gocce di soluzione tampone a pH 7
e lasciare agire per 3-4 min. Quindi gettare il colorante, sollevando il vetrino.
Aggiungere 5 mL di liquido di Giemsa diluito prima dell'uso (5 gocce di colorante puro ogni mL di soluzione tamponata pH 7). Lasciare agire per 10-12 min. Quindi lavare con acqua distillata per almeno 3 min.
Asciugare all'aria e osservare al microscopio dopo montaggio con balsamo del canadà o montante sintetico, oppure dopo oleatura con olio da microscopia (olio di legno di cedro o sintetico).
Per foto e approfondimento vi consiglio questo sito molto ben realizzato, semplice ed esaustivo: www.leopardifg.it/media_gatto/as2005-2006/AS0506_CL5E5F/WebCorpoUmano/pagina_celluladelsangue.htm
Se qualcuno di voi fosse interessato, potrei fornire gratuitamente l'occorrente per allestire qualche vetrino, a patto che abbia modo di osservarlo al microscopio ottico.
*** Cercar di far bene e non di far molto. (A. L. Lavoisier) ***
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